操作步驟：提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。

1)    每個干粉反應管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混勻，否則會對實驗效果產生影響）；

2)    每個反應管分別加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物濃度10 μM，對于多個反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中）；

3)    向反應管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根據核酸濃度調整加入的核酸模板體積，并相應調整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為14.1 μL）;

4)    最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（對于多個反應，建議將B buffer加至反應管的蓋子內側，上下顛倒反應管8-10次混勻）；

5)    混勻后，將反應液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應管放入恒溫設備中42 oC孵育30 mins；

6)    反應結束后，加入50 μL酚/氯仿，1:1抽提反應液，12000 rpm離心5 mins，取5 μL上清進行電泳檢測。（或者使用DNA產物純化試劑盒處理反應液后進行電泳檢測）

體系配制

注意事項：

1．  由于試劑盒靈敏度非常高，在進行反應時請注意避免微量核酸染，并盡量考慮設置空白對照以確認是否有核酸污染。

2．  試劑盒保質期12個月。每次使用時，請取出實驗所需的MIRA反應單元的數量，置于冰浴條件下并在8小時內使用；剩余部分，請置于存儲條件下。

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